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| Untersuchte Arbeit: Seite: 19, Zeilen: 1ff (komplett) |
Quelle: Schröder 2004 Seite(n): 40, 41, Zeilen: 40: 1-5; 41: 1-15 |
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| 3.3 Zellkulturpflege
3.3.1 Auftauen der Zellen Die Zellen wurden im Einfrier-Röhrchen bei 37oC im Wasserbad aufgetaut, anschließend in 5ml RPMI – Medium überführt und bei 1200 rpm für 5 min bei 4oC zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen, das Zellpellet in 8ml RPMI-Medium mit 10% FCS aufgenommen und anschließend in kollagenbeschichtete 25T-Fläschchen überführt. 3.3.2 Einfrieren der Zellen Die Zellen wurden in einem Gemisch aus 10% DMSO, 10% FCS, 80% RPMI – Medium resuspendiert und zunächst von Raumtemperatur um 1oC pro Minute auf – 80oC abgekühlt und dann in flüssigem Stickstoff bei –198oC eingefroren. 3.3.3 Passagieren der Zellen Die Zellen wurden vor dem Passagieren vom Boden der Zellkulturflasche gelöst. Dazu wurde zunächst das Medium abgesaugt und anschließend der Zellrasen gleichmäßig mit 1ml Trypsin-EDTA Lösung (1x konzentriert) bedeckt. Nach ein bis zwei Minuten wurde die überstehende Lösung bis auf wenige μl abgesaugt und die Zellkulturflasche für einige Minuten in den Inkubator gestellt. Danach wurden die abgelösten Zellen in 5ml Medium resuspendiert. Entsprechend ihres Wachstumsverhaltens wurden die Zellen 2 mal pro Woche passagiert: |
3.3. Zellkulturpflege
3.3.1. Auftauen der Zellen Die Zellen wurden im Einfrier-Röhrchen bei 37oC im Wasserbad aufgetaut, anschließend in 5ml RPMI – Medium überführt und bei 1200rpm für 5 min bei 4oC zentrifugiert. [Seite 41] Der Überstand wurde verworfen, das Zellpellet in 8ml RPMI – Medium mit 10% FCS aufgenommen und anschließend in kollagenbeschichtete 25T-Fläschchen überführt. 3.3.2. Einfrieren der Zellen Die Zellen wurden in einem Gemisch aus 10% DMSO, 10% FCS, 80% RPMI – Medium resuspendiert und zunächst von Raumtemperatur um 1oC pro Minute auf – 80oC abgekühlt und dann in flüssigem Stickstoff bei –198oC eingefroren. 3.3.3. Passagieren der Zellen Die Zellen wurden vor dem Passagieren vom Boden der Zellkulturflasche gelöst. Dazu wurde zunächst das Medium abgesaugt und anschließend der Zellrasen gleichmäßig mit 1ml Trypsin – EDTA Lösung (1x konzentriert) bedeckt. Nach ein bis zwei Minuten wurde die überstehende Lösung bis auf wenige μl abgesaugt und die Zellkulturflasche für einige Minuten in den Inkubator gestellt. Danach wurden die abgelösten Zellen in 5ml Medium resuspendiert. Entsprechend ihres Wachstumsverhaltens wurden die Zellen 2 mal pro Woche passagiert: |
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