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| Untersuchte Arbeit: Seite: 39, Zeilen: 1 ss. (página entera) |
Quelle: Cervello 2009 Seite(n): 58, 59, Zeilen: 58: 11 ss.; 59: 1 ss. |
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| Reactivos fluorescentes.
Disponemos en la actualidad de diferentes marcadores de fluorescencia dependiendo de su unión a la célula. • Marcadores fluorescentes de unión covalente: son fluorocromos que reaccionan y se usan para marcar proteínas, lípidos, o bien otras moléculas biológicas. Deben ser suficientemente selectivos y reactivos. Se emplean cromóforos con grupos isotiocianato, clorotrirzinil, y ésteres de succinimida, por su capacidad de unión. El fluorocromo más empleado es la fluoresceína. Otros que se han descrito y empleado son: rodamina, Texas red, cianinas (láseres diodos), etc., pero el más famoso es la ficoeritrina (ficobiliproteína) por su gran absorción, rendimiento y fotoestabilidad; además se puede excitar a 488 nm pero emite más allá del espectro de la fluoresceína permitiendo el doble análisis con un solo láser. Actualmente se ha generalizado el estudio multiparamétrico de antígenos celulares con el empleo simultáneo de 3 y 4 anticuerpos conjugados cada uno con fluorocromos con diferente longitud de emisión (FITC; R-PE, PerCP, AFC, tándems de fluorocromos, etc). • Marcadores fluorescentes de unión no covalente: son fluorocromos que debido e su especial composición molecular se unen a determinados componentes celulares. Entre ellos: - Marcadores del contenido en ADN y ARN: Según el tipo son más o menos específicos para el ADN, ARN, o determinadas bases. Se emplean el Hoechst 33342 (Unión a A-T, vital), DAPI (A-T), DIPI (A-T), cromomicina A3 (Unión a G-C), olivomicina (G-C), mitramicina (G-C). El naranja de acridina se une al ADN y ARN pero tiene la particularidad de emitir en diferente longitud según al tipo de ácido nucleico al que está unido. De uso común es el Yoduro de Propidio (PI, unión intercalante) que se excita con un láser de 488 nm. |
Reactivos fluorescentes.
Disponemos en la actualidad de diferentes marcadores de fluorescencia dependiendo de su unión a la célula. • Marcadores fluorescentes de unión covalente: son fluorocromos que reaccionan y se usan para marcar proteínas, lípidos, o bien otras moléculas biológicas. Deben ser suficientemente selectivos y reactivos. Se emplean cromóforos con grupos isotiocianato, clorotrirzinil, y ésteres de succinimida, por su capacidad de unión. El fluorocromo más empleado es la fluoresceína. Otros que se han descrito y empleado son: rodamina, Texas red, cianinas (láseres diodos), etc., pero el más famoso es la ficoeritrina (ficobiliproteína) por su gran absorción, rendimiento y fotoestabilidad; además se puede excitar a 488 nm pero emite más allá del espectro de la fluoresceína permitiendo el doble análisis con un solo láser. Actualmente se ha generalizado el estudio multiparamétrico de antígenos celulares con el empleo simultáneo de 3 y 4 anticuerpos conjugados cada uno con fluorocromos con diferente longitud de emisión (FITC; R-PE, PerCP, AFC, tándems de fluorocromos, etc). • Marcadores fluorescentes de unión no covalente: son fluorocromos que debido e su especial composición molecular se unen a determinados componentes celulares. Entre ellos: [página 59] - Marcadores del contenido en ADN y ARN: Según el tipo son más o menos específicos para el ADN, ARN, o determinadas bases. Se emplean el Hoechst 33342 (Unión a A-T, vital), DAPI (A-T), DIPI (A-T), cromomicina A3 (Unión a G-C), olivomicina (G-C), mitramicina (G-C). El naranja de acridina se une al ADN y ARN pero tiene la particularidad de emitir en diferente longitud según al tipo de ácido nucleico al que está unido. De uso común es el Yoduro de Propidio (PI, unión intercalante) que se excita con un láser de 488 nm. |
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